Nucview 488 caspase 3 assay 1 Kit

Nouveau substrat de caspase fluorogène perméable à la membrane cellulaire, conçu pour détecter l'activité de la caspase-3/7 dans les cellules vivantes en temps réel. Contrairement aux tests de caspase conventionnels, le substrat nucview 488 caspase-3 détecte l'activité de la caspase-3/7 dans des cellules individuelles intactes sans inhiber l'activité de la caspase.

Le substrat de la caspase-3 nucview 488 est un nouveau substrat fluorogénique de la caspase, perméable à la membrane cellulaire, conçu pour détecter l'activité de la caspase-3 dans les cellules vivantes en temps réel. Le taux d'apoptose varie généralement d'une cellule à l'autre, même au sein d'une même population. Par conséquent, divers événements apoptotiques ou marqueurs accompagnant le processus apoptotique se produisent également différemment selon les cellules. Il est donc important de pouvoir détecter ces événements apoptotiques sur une base cellulaire individuelle. Traditionnellement, l'activité des caspases est détectée soit à l'aide d'un substrat enzymatique fluorogène imperméable à la membrane, comme le devd-r110, soit à l'aide d'un inhibiteur marqué par fluorescence, comme le réactif flica. Dans le premier cas, une lyse cellulaire est nécessaire, ce qui exclut la détection de l'activité des caspases dans les cellules vivantes. En outre, ces tests de caspase ne mesurent que l'activité caspase moyenne d'une population cellulaire très hétérogène à un moment donné. Dans ce dernier cas, bien qu'un réactif flica puisse pénétrer dans des cellules vivantes pour détecter l'activité des caspases, seul le signal fluorescent initial suivant l'application du réactif peut véritablement refléter l'activité de l'enzyme ou l'état des cellules apoptotiques, car tout signal détecté après l'"instantané" initial devra tenir compte de l'interférence potentielle de l'inhibiteur de l'enzyme et de la cellule apoptotique elle-même. Contrairement aux tests de caspase conventionnels, le substrat nucview 488 caspase-3 détecte l'activité de la caspase-3 au sein de cellules individuelles intactes sans inhiber l'activité de la caspase-3. Le substrat se compose d'un colorant adn fluorogène et d'une fraction de substrat devd spécifique de la caspase-3. Le substrat, qui est à la fois non fluorescent et non fonctionnel en tant que colorant d'adn, traverse rapidement les membranes cellulaires pour entrer dans le cytoplasme, où il est clivé par la caspase-3 pour former un colorant d'adn à haute affinité qui colore le noyau en vert vif. Ainsi, le substrat de la caspase-3 nucview 488 est bi-fonctionnel, permettant la détection de l'activité intracellulaire de la caspase-3 et la visualisation des changements de la morphologie nucléaire pendant l'apoptose. la coloration fluorescente produite en réponse à l'activité de la caspase-3 est compatible avec une fixation et une perméabilisation ultérieures pour une immunocoloration. Le kit contient le substrat nucview 488 caspase-3 et un inhibiteur de la caspase-3, ac-devd-cho, suffisants pour 100 essais en cytométrie de flux ou en microplaque (volume d'essai de 200 ul). Le kit d'essai contient suffisamment de réactifs pour 25 essais (volume d'essai de 200 ul). Le nombre d'essais de microscopie à fluorescence pouvant être réalisés avec le kit peut varier en fonction de la taille du récipient de culture et du volume de coloration utilisé. Le kit constitue un outil pratique pour établir le profil de la population de cellules apoptotiques en fonction de l'activité de la caspase-3 en utilisant la microscopie à fluorescence ou la cytométrie de flux.