Dual apopt assay with nucview 488 caspase-3 subst and cf594 annex v 1 kit

Pour établir le profil des cellules apoptotiques et étudier la relation entre deux événements importants de l'apoptose, l'activation de la caspase-3 et la translocation de la phosphatidylsérine (ps)

Ce kit fournit deux marqueurs d'apoptose, notre nouveau substrat nucview 488 caspase-3 et l'annexin v conjuguée à la fluorescence rouge cf594, pour établir le profil des cellules apoptotiques et étudier la relation entre deux événements importants de l'apoptose, l'activation de la caspase-3 et la translocation de la phosphatidylsérine (ps). le taux d'apoptose varie d'une cellule à l'autre, même au sein d'une même population. par conséquent, divers événements apoptotiques ou marqueurs accompagnant le processus apoptotique se produisent également différemment selon les cellules. il est donc important de pouvoir détecter ces événements apoptotiques sur une base cellulaire individuelle. traditionnellement, l'activité des caspases est détectée soit à l'aide d'un substrat enzymatique fluorogène imperméable à la membrane, comme le devd-r110, soit à l'aide d'un inhibiteur marqué par fluorescence, comme le réactif flica. dans le premier cas, une lyse cellulaire est nécessaire, ce qui exclut la détection de l'activité de la caspase dans des cellules vivantes. en outre, ces tests de caspase ne mesurent que l'activité caspase moyenne d'une population cellulaire très hétérogène à un moment donné. dans ce dernier cas, bien qu'un réactif flica puisse pénétrer dans des cellules vivantes pour détecter l'activité des caspases, seul le signal fluorescent initial suivant l'application du réactif peut réellement refléter l'activité de l'enzyme ou l'état des cellules apoptotiques, car tout signal détecté après l'"instantané" initial devra tenir compte de l'interférence potentielle de l'inhibiteur de l'enzyme et de la cellule apoptotique elle-même.contrairement aux tests de caspase conventionnels, le substrat nucview 488 caspase-3 détecte l'activité de la caspase-3 dans des cellules entières individuelles de manière non interférente. le substrat se compose d'un colorant adn fluorogène et d'une fraction de substrat devd spécifique de la caspase-3. le substrat, qui est à la fois non fluorescent et non fonctionnel en tant que colorant d'adn, traverse rapidement les membranes cellulaires pour entrer dans le cytoplasme, où il est clivé par la caspase-3 pour former un colorant d'adn à haute affinité qui colore le noyau en vert vif. ainsi, le substrat nucview 488 caspase-3 est bi-fonctionnel, permettant la détection de l'activité de la caspase-3 et la visualisation de la morphologie nucléaire apoptotique.le kit contient des réactifs suffisants pour 50 essais de cytométrie en flux (volume d'essai de 200 ul). le nombre d'essais de microscopie à fluorescence pouvant être réalisés avec le kit peut varier en fonction de la taille du récipient de culture et du volume de coloration utilisé.