Leptin Human ELISA 96 tests

Le test Elisa de la leptine suit un format typique de test de type " sandwich " en deux étapes. Il fait appel à deux anticorps monoclonaux hautement spécifiques. Il comprend tous les composants nécessaires pour le réaliser (plaque coatée de 96 puits, anticorps conjugué, substrat, anticorps de détection, standards, contrôles de qualité et tampon de dilution et de lavage).

Le principe de l'essai immunoenzymatique suivant suit un essai typique de capture en deux étapes ou de type "sandwich". L'essai utilise deux anticorps monoclonaux hautement spécifiques : un anticorps monoclonal spécifique de la leptine est immobilisé sur la plaque de micropuits et un autre anticorps monoclonal spécifique d'un épitope différent de la leptine est conjugué à la biotine. Au cours de la première étape, la leptine présente dans les échantillons et les standards est liée à l'anticorps immobilisé et à l'anticorps biotinylé, formant ainsi un complexe en sandwich. L'anticorps biotinylé excédentaire et non lié est éliminé par une étape de lavage. Dans la deuxième étape, on ajoute de la streptavidine-hrp, qui se lie spécifiquement à tout anticorps biotinylé lié. Là encore, la streptavidine-hrp non liée est éliminée par une étape de lavage. Ensuite, le substrat enzymatique est ajouté (tmb), formant un produit de couleur bleue qui est directement proportionnel à la quantité de leptine présente. La réaction enzymatique est terminée par l'ajout de la solution d'arrêt, ce qui convertit la couleur bleue en une couleur jaune. L'absorbance est mesurée sur un lecteur de plaque de microtitration à 450 nm. Un ensemble de standards est utilisé pour tracer une courbe standard à partir de laquelle la quantité de leptine dans les échantillons et les contrôles peut être directement lue.