B. Pertussis / Parapertussis triplex (PCR Tps Réel) 1 Kit

Le coffret de PCR en Temps réel Bordetella pertussis/parapertussis est utilisé pour la détection qualitative ou quantitative de l’ADN bactérien de Bordetella pertussis et Bordetella parapertussis dans les échantillons humains d’aspiration nasopharyngée.

Ce coffret repose sur une réaction d’amplification d’acides nucléiques spécifiques et une analyse en temps réel de l’activité 5’ nucléase de l'ADN polymérase par un système optique de détection de la fluorescence.
des réactions d’amplification spécifique de l’élément répété is481 de bordetella pertussis (50 à 100 copies/génome), de l’élément répété is1001 de bordetella parapertussis (30 à 35 copies/génome) et d’un contrôle cellulaire d’extraction sont réalisées à partir de l'ADN extrait de l’échantillon. la sonde spécifique de bordetella pertussis est marquée par le fluorochrome fam et émet une fluorescence spécifique suite à son hydrolyse au cours de l’élongation du produit d’amplification de b. pertussis. La sonde spécifique de bordetella parapertussis est marquée par le fluorochrome hex et émet une fluorescence spécifique suite à son hydrolyse au cours de l’élongation du produit d’amplification de b.parapertussis. La sonde spécifique du contrôle cellulaire est marquée par le fluorochrome atto647n et émet une fluorescence spécifique suite à son hydrolyse au cours de l’élongation du produit d’amplification du contrôle. La mesure des intensités de fluorescence en temps réel relate l’accumulation des produits d’amplification spécifiques, sans nécessiter de manipulation des amplicons après l’amplification.
ce système d’amplification a été validé à partir d’échantillons humains d’aspiration nasopharyngée. le coffret de pcr en temps réel bordetella comporte un système prêt à l’emploi spécifique pour la détection de b. pertussis et de b. parapertussis. le coffret contient les réactifs et les enzymes nécessaires à l’amplification de l'ADN de b. pertussis et de b. parapertussis. la fluorescence est émise et mesurée de façon individuelle par un système optique au cours de la pcr. la détection des fragments amplifiés d'ADN de b. pertussis est réalisée par un fluorimètre en utilisant le canal 530. le marqueur d’extinction moléculaire est un marqueur non-fluorescent (black hole quencher) : bhq1.
la détection des fragments amplifiés d'ADN de b. parapertussis est réalisée par un fluorimètre en utilisant le canal 560 Le marqueur d’extinction moléculaire est un marqueur non-fluorescent (black hole quencher) : bhq1.
en parallèle, ce coffret contient un système pour identifier la qualité de l’extraction de l'ADN en mesurant la fluorescence d’un contrôle cellulaire sur le canal 670. le marqueur d’extinction moléculaire est un marqueur non-fluorescent: bhq3.
l’utilisateur peut donc choisir un système permettant soit la détection de b. pertussis et b. parapertussis et du contrôle cellulaire, soit la détection de b. pertussis et du contrôle cellulaire, soit la détection de b. parapertussis et du contrôle cellulaire.
un contrôle positif externe d’amplification fourni dans le coffret à la concentration de 100 000 copies/μl de plasmide de b. pertussis et 100 000 copies/μl de b. parapertussis, permet de déterminer la charge bactérienne.